舌鳞癌中纤维连接蛋白的表达及其具有的意义

舌鳞癌是指的发生在舌头上的鳞状细胞癌，属于恶性程度较高的肿瘤。细胞外基质尤其是基底膜成分在肿瘤的发生、发展中的作用日益受到关注。作为细胞外基质和基底膜重要组成成分的纤维连接蛋白（fibronectin'FN）与细胞的恶性转化和癌的发生、发展关系密切。为了进一步了解舌鳞癌发生、发展过程中FN的变化及意义，我们采用免疫组织化学方法观察了正常舌粘膜、舌上皮异常增生及舌鳞癌组织中FN的表达变化；利用间接免疫荧光方法观察了体外培养的舌鳞癌细胞FN的表达；并通过火箭免疫电泳的方法分析了舌鳞癌患者血浆FN浓度的变化。
　　1　材料与方法
　　1.1　标本来源
　　1.1.1　组织标本选取华西医科大学口腔医学院1990～1996年手术活检标本82例，包括正常舌粘膜10例，上皮异常增生22例，舌鳞癌50例。50例舌鳞癌中高分化18例，中度分化22例，低分化10例，伴有淋巴结转移的17例。所有标本均经10％福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片。
　　1.1.2　人舌鳞癌细胞将人舌鳞癌Tca－8113细胞接种于盖玻片上，置于含15％小牛血清的RPMI1640培养液中培养，24小时后，取出长有细胞的盖玻片，3.7％甲醛固定。
　　1.1.3　血浆标本正常人血浆标本取自华西医科大学附属第一医院健康体检者，共25例，其中男性15例，女性10例；年龄40～60岁。舌鳞癌患者血浆取自华西医科大学口腔医学院，共22例，其中男性12例，女性10例；年龄45～66岁。
　　1.2　主要试剂
　　人血浆FN（参考标准），兔抗人FN多克隆抗体及RPMI1640培养基均购自Gibco公司，ABC试剂盒及鼠抗人FN单克隆抗体购自北京中山生命技术公司，绵羊抗兔IgG－FITC购自华美生物工程公司。
　　1.3　方法
　　1.3.1　免疫组织化学按ABC法进行，DAB显色，苏木素复染，Ⅰ抗为鼠抗人FN单克隆抗体，工作浓度为1:100，另以PBS代替Ⅰ抗作为阴性对照，观察时均以标本血管基底膜着色为阳性对照。
　　1.3.2　间接免疫荧光参照文献进行。Ⅰ抗为兔抗人FN多克隆抗体，工作浓度为1:1000；Ⅱ抗为绵羊抗兔IgG－FITC，工作浓度为1:40；另以PBS代替Ⅰ抗为阴性对照，已知阳性的人成纤维细胞为阳性对照。
　　1.3.3火箭免疫电泳参照参考文献进行。抗体为兔抗人FN多克隆抗体，工作浓度为1:500。
　　2　结果
　　2.1　正常舌粘膜、上皮异常增生及舌鳞癌组织中FN的表达
　　正常舌粘膜、上皮异常增生及舌鳞癌组织中间质成分的抗FN免疫反应均为阳性，染色为棕黄色，呈丝状或线状分布。正常舌粘膜的基底膜未见与间质明显区分的抗FN阳性反应，5例（22.7％）上皮异常增生组织的基底膜则有明显的抗FN阳性反应，37例（74％）舌鳞癌的癌巢周围有基膜样抗FN阳性反应，抗FN阳性反应物呈线状或条索状包绕癌巢，并与间质抗FN阳性产物有明显分界（图3）。基膜FN的表达比例在正常舌粘膜、上皮异常增生、舌鳞癌之间有非常显著性差异（χ2=28.03'P＜0.01）。50例舌鳞癌中，18例高分化癌中的9例（50％），22例中度分化癌中的18例（81.8％），以及10例（100％）低分化癌，它们的基膜FN均为阳性，经统计学分析表明基膜FN的表达比例在上述不同分化程度的鳞癌间有非常显著性差异（χ2=9.60'P＜0.01）。此外50例舌鳞癌中，24例（72.7％）无转移的原发灶，其基膜FN为阳性；13例（76.5％）合并转移的原发灶基膜也为FN阳性，但经统计学分析表明，基膜FN表达比例在此二者之间的差异无显著性（χ2=0.08'P0.05）。
　　2.2　舌鳞癌细胞系FN的表达
　　间接免疫荧光结果发现，舌鳞癌Tca－8113细胞表面FN的免疫荧光呈光亮的斑块状分布。
　　2.3　舌鳞癌患者血浆FN浓度变化
　　舌鳞癌患者血浆FN浓度平均为0.481g/L，明显高于正常对照组的平均值（0.357g/L）（t=4.26'P＜0.01）。22例舌鳞癌患者中血浆FN浓度很高者为0.775g/L，很低者为0.318g/L；25例正常人中血浆FN浓度很高者为0.477g/L，很低者为0.238g/L。45.5％的患者血浆FN浓度高于正常对照组。
　　3　讨论
　　应用免疫组织化学方法观察了82例舌组织中的FN，据尹玉新等方法，将存在于不同部位的FN分别称为基膜FN和间质FN。结果表明，所有标本的间质FN均为阳性，但基膜FN的表达与舌鳞癌有关，随着舌上皮的恶变，基膜FN表达比例增高。进一步研究表明，基膜FN的表达比例也与癌的分化程度相关，随着舌鳞癌的低分化程度，基膜FN的表达比例也呈上升趋势。既往研究表明，FN表达增强的现象也见于皮肤肿瘤。
　　癌细胞是否表达FN，尚有争议。本文体外研究表明，舌鳞癌细胞能够表达FN，从而推测体内舌鳞癌基膜FN的沉积来自于癌细胞FN的表达。基膜FN的沉积可能是代偿性的，以使癌细胞与间质继续维持粘附状态。有关体内肿瘤FN的表达与侵袭、转移的关系，也存在不同意见。尹玉新等研究发现，胃肠道肿瘤中FN的表达与转移无关；但王曙光等发现胆管癌FN的表达与转移相关。本文的研究结果与尹玉新等研究结果一致。越来越多的研究表明，基底膜成分的改变与肿瘤的预后相关。本文虽未探讨基膜FN与舌鳞癌预后的关系，但为其研究提供了基础，而且本研究发现，基膜FN的表达与舌上皮恶变有关，基膜FN可考虑作为舌鳞癌发生的标志；同时对基膜FN表达的分析也有助于舌鳞癌恶性程度的评估。舌鳞癌患者血浆FN浓度的升高，可能与体内癌细胞FN分泌增多有关，FN对舌鳞癌的负荷判断有一定价值。但由于血浆FN浓度受性别、年龄等因素的影响，而休克、感染等非肿瘤疾病也可导致血浆FN浓度的上升。因此，以血浆FN作为肿瘤标志尚待进一步研究。